HLA的DNA分型及評述
1991年11月召開的11屆IHW上提出了HLA的DNA分型方法，使得HLA多態性的檢測有了突破性的進展，這些方法眾多，現列舉如下。
1、PCR-ASO（或PCR-SSO）：即PCR技術與等位基因特異順序的寡核苷酸（allelic specific oligonucleotide,ASO）或順序待異性的寡核苷酸（sequence specific oligonucleotide,SSO）探針相結合的方法。用PCR技術擴增從需定型細胞中抽提出的高度多態性基因片段的DNA，再與特異的序列明確的寡核苷酸（SSO）探針雜交，可區分特定編碼區DNA順序的細微差別。
2、PCR-RFLP：即PCR技術與限制性片段長度多態性（restriction fragment lengthpolmorphism,RFLP）分析技術相結合。HLA抗原多態性是由其編碼基因的堿基順序不同的結果。不同個體HLa DNA堿基順序的差別造成了限制性內切酶切位點的不同，從而導致DNA電泳后限制性片段長度上的多態性。主要步聚是經印跡法轉移到硝酸纖維膜上，然后用已知的cDNA探針進行雜交，經放射自顯影可查知相應基因的何種長度的DNA酶切片段上。但此技術所用的內切酶量大，方法復雜，耗費昂貴，已更先進、精確的以PCR為基礎的其它DNA分型所取代。
3、PCR-SSCP：即PCR與單鏈構象多態性（single strand conformation polymorphism,SSCP）分析相結合的方法。其原理是單鏈DNA可形成穩定的構象，在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中其遷移率不僅與鏈的大小有關，而且受鏈的核苷酸順序的影響。由于使用相同引物擴增產物長度-致因而單鏈DNA在電泳中的遷移格局反映了單鏈核苷酸組成的不同，可十分敏感地檢測等位基因間DNA順序的微小差別，目前此技術已應用于DP等位點的分型。
盡管采用DNA水平的HLA分型工作有了很大進展，但血清學分型，特別對I類基因產物仍是分型基礎。在可以預見的時期內，DNA分型是無法取代它的。但應該強調，在第11次IHW及隨后召開的WHO-HLA命名委員均已早明，今后凡屬新HLA特異性必須有相應的DNA序列為基礎，否則不再予以命名。
應該看到，HTC與PLT在對HLA-D和HLA-DP特異性檢測上有過肯定的貢獻，但由于方法較為復雜，耗時費力，且影響因素多，精確程度有限，已逐漸被眾多DNA水平定型方法所取代。
掃一掃
